細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。 二氧化碳不僅是細(xì)胞生長的必需成分，還與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。
凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能完全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。
下面介紹幾種常見的細(xì)胞污染類型及處理方法。
一、常見污染類型：
細(xì)菌污染：
特征：大小在0.5~5 μm，比動(dòng)物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時(shí)爆發(fā)式增殖；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動(dòng)。
處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。
真菌污染：
特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫，僅對局部細(xì)胞影響較大，其他地方生長正常。會(huì)形成孢子，容易污染其他細(xì)胞。
處理方法：真菌污染較難根除，不建議保留，建議消殺后丟棄。
支原體污染：
特征：最小的微生物，無法通過光學(xué)顯微鏡看見，但可通過電鏡觀察到。感染支原體的細(xì)胞，在某一時(shí)間點(diǎn)碎片突然增多，隨著傳代，細(xì)胞狀態(tài)顯著變差。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細(xì)胞房其他細(xì)胞。
鑒定方法：PCR法、顯色法、熒光染色法等。
處理方法：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。
黑膠蟲污染：
特征：無明確定義，鏡下無法直接觀察到。主要表現(xiàn)為細(xì)胞狀態(tài)差，黑點(diǎn)和碎片多，布朗運(yùn)動(dòng)。通過檢測發(fā)現(xiàn)主要為支原體污染，部分為未知的增殖不明顯的微生物污染。
處理方式：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加黑膠蟲/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。
細(xì)胞交叉污染
特征：即不同的細(xì)胞混雜在一起
二、鑒定方法：
同種屬：STR鑒定，多等位基因數(shù)大于3個(gè)。
（需考慮本身的遺傳背景，如EA.hy 926為融合細(xì)胞，本身就包含兩套遺傳信息）
不同種屬：PCR法，對種屬特異性基因進(jìn)行擴(kuò)增，不同種屬產(chǎn)物大小不同。
處理方法：建議重新引種。
三、細(xì)胞污染后的處置：
細(xì)胞一旦發(fā)現(xiàn)有污染出現(xiàn)，應(yīng)及時(shí)對所用試劑和耗材進(jìn)行清理。耗材可更換新的或者重新高壓滅菌，試劑可重新過濾除菌或者更換新批次，操作臺(tái)和細(xì)胞房需用消毒液進(jìn)行全面清潔消殺后方可復(fù)蘇新的細(xì)胞，以免反復(fù)出現(xiàn)污染。
四、細(xì)胞污染的預(yù)防：
①實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無菌實(shí)驗(yàn)檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。
②操作過程防止污染。
③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。
④實(shí)驗(yàn)開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時(shí)對手套進(jìn)行消毒。
⑤不要從敞開的容器口上方經(jīng)過，以避免衣服上掉落不明物體對細(xì)胞的污染。
⑥細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。
⑦瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。
