ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體,通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)在生物實驗技術(shù)中,ELISA是一種非常常見的分析方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。該實驗因其靈敏度較高,特異性較好,操作較簡單,可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。而在進(jìn)行ELISA實驗的過程中,有時會遇到一種被稱為“花板”的現(xiàn)象。
“花板”現(xiàn)象,顧名思義,是指在進(jìn)行ELISA實驗時,酶標(biāo)板上的反應(yīng)孔出現(xiàn)了不均勻的顏色分布,使得孔內(nèi)的顏色看起來像是“花”一樣。所謂“花板”,就是空白、陰性、陽性對照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高,弱陽性結(jié)果較多。這一現(xiàn)象的出現(xiàn),影響了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,往往是由于實驗過程中的某些操作不當(dāng)或試劑的問題所導(dǎo)致的。對“花板”現(xiàn)象進(jìn)行了分析和總結(jié),認(rèn)為花板原因大多在樣品,解決辦法主要在洗滌,孵育和顯色過程也會導(dǎo)致。
免疫熒光試驗(immunofluorescence test)一種免疫標(biāo)記技術(shù)。用于檢測相應(yīng)抗原或抗體。即用熒光素與抗體連接成熒光抗體,再與待檢標(biāo)本中的抗原反應(yīng),置熒光顯微鏡下觀察,抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光,借此對標(biāo)本中的抗原進(jìn)行鑒定或定位。