抗體(antibody,Ab)是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來(lái)分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下,由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。抗體特異性鑒定是免疫化學(xué)技術(shù)中,確??乖?抗體反應(yīng)專一性的基礎(chǔ)。從根本上驗(yàn)證特異性,投稿國(guó)際期刊,常常需要準(zhǔn)備這方面數(shù)據(jù)。
蛋白質(zhì)通過(guò)鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度,使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。蛋白質(zhì)的沉淀(protein precipitation),沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過(guò)程。蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象,稱為蛋白質(zhì)的沉淀。蛋白質(zhì)沉淀常用的方法有鹽析、等電點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。
ELISA實(shí)驗(yàn)通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此,不嚴(yán)格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌,洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào),從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號(hào)。而不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。在做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí),洗板有兩種方法:手工法洗板 和 洗板機(jī)洗板。二者沒有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結(jié)果。
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是目前臨床上最常用的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀,既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn),又可用于少量標(biāo)本的檢測(cè),既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測(cè)等領(lǐng)域。ELISA有敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的特點(diǎn),但其同時(shí)存在影響因素多的不足,現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)操作中常見的影響因素進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn),以提高的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
![]() 撫生公眾號(hào) |
![]() 客服-夏菊花 |
![]() 客服-陳筱筱 |
![]() 客服-李瑞瑞 |
![]() 客服-郭笑笑 |
![]() 客服-李爽 |
客服-林燕 |